古琴的调弦定音主要有两个目的。
一、是为了演奏乐曲的需要，需按某种特定的音列调整确定各弦的相对音高，通常可以通过古琴散、按、泛音的关系相互校调；
二、演奏时需要与其它乐器以及人声相配合（合奏、重奏、协奏、伴奏等），需确定各弦（或某弦）的绝对音高，一般需要借助于定音器或其他乐器进行校调。
下面以最基本的正调（F调）为例，来说明古琴调弦定音的方法和技巧。其他各种定调均可以在F调的基础上调得。
一、古琴的定音
现代，古琴常用三弦定为F音高，将其称为“正调”，正调即古琴七弦散音的基本音，历史上有过多种名称，以“仲吕调”名称较为普遍。古琴以琴上第一弦定为黄钟音高，以第三弦为宫音，按正五声音阶依次定其七弦，即“下征、下羽、宫、商、角、征、羽”，称为正调。因其一弦音高定为黄钟，相当于钢琴上的Ｃ，则第三弦宫音，相当于音名ｄｏ。音高为仲吕，相当于钢琴上的Ｆ，以其宫音音高为仲吕，故正调又称仲吕调。
二、古琴调弦法
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散音调弦法：即根据七根弦发出的散音来判断音高，对听音准的要求非常高，学习古琴的大部分成人，并没有通过专业的音乐基础训练，故而如法完全靠耳朵来分辨音高。但随着科技的发展，在手机上下载调音器已不是难事，此种方法也是根据七根弦发出的散音软件来帮你判断高低，从而达到调弦的目的。
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散按调弦法：其实散按调弦法我们接触的最多，比如《仙翁操》就是运用了一散一按的方式让初学者熟悉调弦，只不过此种方法会有误差，并且没有一套完整的推演方法。故而只能用于校好七根弦后的检验。
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泛音调弦法：泛音的演奏误差相较散音、按音来讲是最小的，所以使用泛音来调弦。下面我们介绍一种泛音调弦的过程。
例：首先确定一弦（一般选用四弦或者五弦）选择一弦音定高为C（黄钟），那么就以一弦为基准弦进行调弦，整个过程中不可以再动一弦。先松紧（或松或紧之谓，亦名紧慢）四弦，使四弦７徽泛音与一弦５徽泛音音高相同，即达到同度，此时，四弦即已调好。继以四弦５徽泛音为准，松紧二弦，使二弦４徽泛音与四弦５徽泛音同度，此时，二弦即已调好。再以四弦４徽泛音为准，松紧六弦，使六弦５徽泛音与四弦４徽泛音同度，此时，六弦即已调好。再以六弦７徽泛音为准，松紧三弦，使三弦５徽泛音与六弦７徽泛音同度，此时，三弦即已调好。再以二弦５徽泛音为准，松紧五弦，使五弦７徽泛音与二弦５徽泛音同度，此时，五弦即已调好。再以五弦４徽泛音为准，松紧七弦，使七弦５徽泛音与五弦４徽泛音同度，此时，七弦即已调好。如此，七根弦初步调毕。
调弦的进程是按照正调泛音的同度对应关系来进行的，可以灵活运用，不必拘泥以上举例。每弦均有二到三个对应点，组成一个泛音同度网，可以自由选择。
三、特殊定弦弦式
传统琴曲中不少乐曲由于调性的不同，定弦也有所不同。多数采用改变宫音所在弦的位置，重新确定与邻弦之间五声音阶体系的音程关系。即调整一根或两三根弦的音高，改变原调五声音阶的音程关系式为新调五声音阶的音程关系。因此，产生了多种定弦弦式。
常用的调弦转调法
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F调（正调）
定弦校音，使得各弦音高分别为：C、D、F、G、A、c、d，唱作5、6、1、2、3、5、6。代表曲目较多，如：《梅花三弄》《平沙落雁》《流水》《神人畅》等。
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F调侧弄（借正调）
F调侧弄是借用正调的定弦方式，各弦音高不变，但唱作1、2、4、5、6、1、2。代表曲目如：《醉渔唱晚》《忆故人》等。
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C外调（慢二弦）
在正调的基础上慢二弦，使之与一弦散音完全相同，便是古称“慢商调”的《广陵散》专用弦式，各弦音高分别为：C、C、F、G、A、c、d，即C调的1、1、4、5、6、1、2。
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C调（慢三弦）
在正调基础上慢三弦，并用泛音校音：慢三弦四徽至五弦五徽同音高，使得各弦音高分别为：C、D、E、G、A、c、d，唱作1、2、3、5、6、1、2。代表曲目如：《风雷引》等。
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G调（慢一、三、六弦）
在C调慢三弦的基础上，进一步慢一、六弦，并用泛音校音：慢一弦四徽至三弦五徽同音高，再慢六弦七徽至三弦五徽同音高，使得各弦音高分别为：B1、D、E、G、A、B、d，唱作3、5、6、1、2、3、5。代表曲目如：《挟仙游》等。
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bB调（紧五弦）
在正调基础上紧五弦，并用泛音校音：紧五弦五徽至三弦四徽同音高，使得各弦音高分别为：C、D、F、G、bB、c、d，唱作2、3、5、6、1、2、3。代表曲目如：《阳关三叠》《潇湘水云》等。
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bB外调（紧五弦慢一弦）
在bB紧五的基础上慢一弦，并用泛音校音：慢一弦四徽至三弦五徽同音高，也称“胡笳调式”。各弦音高分别为：bB1、D、F、G、bB、c、d，即C调的1、3、5、6、1、2、3，代表曲目如《大胡笳》《小胡笳》《胡笳十八拍》等。
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bE调（紧二、五、七弦）
在bB调紧五弦的基础上，进一步紧二、七弦，并用泛音校音：紧七弦五徽至五弦四徽同音高，紧二弦五徽至五弦七徽同音高，使得各弦音高分别为：C、bE、F、G、bB、c、be，唱作6、1、2、3、5、6、1。代表曲目如：《捣衣》《秋鸿》等。
